Медицинский портал. студентам, врачам, медицинские книги

скачать медицинские учебники, лекции

Главная » Файлы » Иммунология

ОПРЕДЕЛЕНИЕ УРОВНЯ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ИММУННЫХ КОМПЛЕКСОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
21.04.2010, 00:53


Процессы аутосенсибилизации, происходящие в организме человека под воздействием ионизирующей радиации, сопровождаются накоплением циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), в связи с чем определение их содержания является важным этапом оценки вторичного иммунодефицита.

Материалы и оборудование

1. Сыворотка крови (исследуемая).
2. Буфер боратный.
3. Полиэтиленгликоль (мол. М. 6000).
4. Пробирки.
5. Центрифуга высокоскоростная типа Т-24.
6. Спектрофотометр.

Описание метода

Приготовление 0,1 М боратного буфера: 3,410 г борной кислоты и 4,275 г тетрабората натрия смешивают, переносят в мерную колбу и доводят до 1 л дистиллированной водой, рН 8,4.
Сыворотку крови в объеме 200 мкл смешивают с 5 мл 0,1 М боратного буфера. 4 мл смеси приливают к 4 мл 7% раствора полиэтиленгликоля, приготовленного на 0,1 М боратном буферном растворе. Пробу инкубируют 18-20 часов при температуре 4°С. После инкубации смесь центрифугируют при 2000 об/мин в течение 10 мин. Надосадочную жидкость удаляют, препарат дважды отмывают 7% раствором полиэтиленгликоля на 0,1 М боратном буфере и растворяют в 5 мл 0,1 N раствора едкого натра.

Учет результатов

Уровень циркулирующих иммунных комплексов определяют с помощью спектрофотометра при длине волны - 280 нм и выражают в единицах оптической плотности.
Поскольку в настоящее время многие лаборатории оснащены вертикальными фотометрами, возможна постановка данной реакции в модификации микрометодом.
Для этого исследуемую сыворотку разводят боратным буфером в 3 раза. Разведение сыворотки выполняют следующим образом.
В лунку планшета для иммунологических реакций вносят 0,05 мл сыворотки крови и 0,1 мл буфера.
В параллельные лунки второго планшета вносят в первую - 0,25 мл буфера, во вторую - 0,25 мл раствора полиэтиленгликоля. Затем в обе лунки этого планшета вносят по 0,05 мл разведенной сыворотки из первого планшета. Планшет выдерживают 1 час при комнатной температуре. На вертикальном фотометре с использованием светофильтра 450 нм определяют экстинцию. Вычисляют разность показателей сыворотки крови с полиэтиленгликолем и сыворотки с буфером и умножают на 100, что и является величиной ЦИК, выраженной в единицах оптической плотности.



Похожие статьи Добавь в закладки

Категория: Иммунология | Добавил: MedVUZ | Теги: иммунолгия, аутосенсибилизация, лабораторная диагностика, сыворотка крови, иследования, пробирки, спектрофотометр, центрифуга
Просмотров: 5611 | Загрузок: 0 | Рейтинг: 5.0/1
Всего комментариев: 0
Добавлять комментарии могут только зарегистрированные пользователи.
[ Регистрация | Вход ]

РязГМУ поступить контакты сайт история медицинская академия информация скачать акушерство ОЗЗ Доктор Хаус Scrubs сериалы хирургия телефон лекции стоматология офтальмология Хью Лори клиника экзамен Теория Лжи юмор интерны актёры Доктор Тырса терапия PDF практические навыки фармакология учебник диагностика классификация лечение ЕГЭ травматология