Процессы аутосенсибилизации, происходящие в организме человека под воздействием ионизирующей радиации, сопровождаются накоплением циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), в связи с чем определение их содержания является важным этапом оценки вторичного иммунодефицита.
Материалы и оборудование
1. Сыворотка крови (исследуемая).
2. Буфер боратный.
3. Полиэтиленгликоль (мол. М. 6000).
4. Пробирки.
5. Центрифуга высокоскоростная типа Т-24.
6. Спектрофотометр.
Описание метода
Приготовление 0,1 М боратного буфера: 3,410 г борной кислоты и 4,275 г тетрабората натрия смешивают, переносят в мерную колбу и доводят до 1 л дистиллированной водой, рН 8,4.
Сыворотку крови в объеме 200 мкл смешивают с 5 мл 0,1 М боратного буфера. 4 мл смеси приливают к 4 мл 7% раствора полиэтиленгликоля, приготовленного на 0,1 М боратном буферном растворе. Пробу инкубируют 18-20 часов при температуре 4°С. После инкубации смесь центрифугируют при 2000 об/мин в течение 10 мин. Надосадочную жидкость удаляют, препарат дважды отмывают 7% раствором полиэтиленгликоля на 0,1 М боратном буфере и растворяют в 5 мл 0,1 N раствора едкого натра.
Учет результатов
Уровень циркулирующих иммунных комплексов определяют с помощью спектрофотометра при длине волны - 280 нм и выражают в единицах оптической плотности.
Поскольку в настоящее время многие лаборатории оснащены вертикальными фотометрами, возможна постановка данной реакции в модификации микрометодом.
Для этого исследуемую сыворотку разводят боратным буфером в 3 раза. Разведение сыворотки выполняют следующим образом.
В лунку планшета для иммунологических реакций вносят 0,05 мл сыворотки крови и 0,1 мл буфера.
В параллельные лунки второго планшета вносят в первую - 0,25 мл буфера, во вторую - 0,25 мл раствора полиэтиленгликоля. Затем в обе лунки этого планшета вносят по 0,05 мл разведенной сыворотки из первого планшета. Планшет выдерживают 1 час при комнатной температуре. На вертикальном фотометре с использованием светофильтра 450 нм определяют экстинцию. Вычисляют разность показателей сыворотки крови с полиэтиленгликолем и сыворотки с буфером и умножают на 100, что и является величиной ЦИК, выраженной в единицах оптической плотности.
Похожие статьи
Добавь в закладки
| 
