Метод радиальной иммунодиффузии в геле агарозы является в настоящее время основным при определении содержания иммуноглобулинов различных классов в сыворотке крови.

1. Стекла 9x12 см.
2. П-образная рамка 120x90x8 мм для облегчения заливки стекла агаром.
3. Водяная баня на 50-60°С.
4. Пастеровские пипетки с оттянутым концом.
5. Влажная камера.
6. Измеритель.
7. Калибровочная линейка.
8. Коммерческие наборы для определения концентрации иммуноглобулинов
производства "СЕВАК", ЧССР.
9. 0,2 М вероналовый буфер.
10. Реактив для окраски преципитатов.
11. Пробойник круглый диаметром 1.5-2.0 мм для вырезания лунок в геле
агарозы.

Приготовление вероналового буфера: 1,84 г веронала и 0,34 г едкого натра растворяют в 200 мл дистиллированной воды.
Приготовление геля агарозы: агарозу из набора для определения иммуноглобулинов в сыворотке крови "СЕВАК" в количестве 3,6 г высыпают в 200 мл ве-роналового буфера, подогретого до температуры 50-60°С, после чего кипятят в течение 10-15 мин на водяной бане до полного расплавления агара и получения прозрачного геля. Расплавленный агар фильтруют через вату и разливают по 21 мл в подогретые стеклянные цилиндры, которые закрывают пробками и помещают на водяную баню с температурой 56-58°С. Ампулу моноспецифической сыворотки с рабочим титром 1:20-1:30 разводят в 1 мл вероналового буфера, выливают в соответствующий цилиндр, перемешивают и 10-15 мин выдерживают в водяной бане.
Стеклянные пластины размером 9x12 см протирают эфиром, на стекле помещают ограничительную рамку (при отсутствии рамки края можно обработать парафином). Подготовленные таким образом пластины подогревают и помещают на строго горизонтальную поверхность. На середину пластины из цилиндра быстро выливают расплавленный агар, содержащий моноспецифическую сыворотку. Гель с помощью стеклянной палочки быстро и равномерно распределяют по всей поверхности стекла, пузырьки воздуха тщательно удаляют. Пластину с гелем оставляют на горизонтальной поверхности до полного затвердения агара.
С помощью круглого штампа по трафарету в геле вырезают лунки. Расстояние от края стекла до лунок и между лунками должно быть не менее 10 мм. На одном стекле размером 9x12 см можно разместить до 48 лунок. Агар из лунок удаляют пастеровской пипеткой, соединенной с вакуумным или водоструйным насосом. Подготовленные пластины при необходимости можно хранить во влажной камере при температуре 4°С.
Исследуемую сыворотку с помощью пастеровской пипетки с тонко оттянутым концом вносят в лунки до исчезновения вогнутого мениска. Каждую сыворотку вносят в лунки агаровых пластин, содержащих ту или иную моноспецифическую сыворотку. В 4 лунки агаровой пластины вносят цельную и разведенную в 2, 4, 8 раз стандартную (эталонную) сыворотку с известным содержанием иммуноглобулинов всех классов. Ампула со стандартной сывороткой входит в каждый набор моноспецифических сывороток. После внесения исследуемых сывороток пластины помещают во влажную камеру, в качестве которой можно использовать эксикатор с налитой на дно водой или другую подходящую посуду с крышкой и инкубируют в течение 24 часов (для определения IgA и IgG) или 48 часов (для определения IgM и IgD).
После инкубации пластины извлекают из влажной камеры и окрашивают подходящим красителем: бромфеноловым синим (состав краски: бромфеноло-вый синий 0.5 г, свинец уксуснокислый 4% водной раствор - 10 мл, уксусная кислота ледяная 20 мл, вода дистиллированная до 1 л), амидо черным 10 В (состав краски: 1% амидо черного в 7% водном растворе уксусной кислоты).

Для оценки результатов реакции измеряют диаметр образовавшихся вокруг лунок колец преципитации. Затем на полулогарифмической бумаге наносят на оси абсцисс диаметры колец стандартной сыворотки, а по оси ординат - известную концентрацию каждого класса иммуноглобулинов в г/л и строят калибровочный график, с помощью которого вычисляют содержание иммуноглобулинов в каждой исследуемой сыворотке.
В норме в сыворотке содержится 0,65-1,65 г/л IgM; 7,50-15,45 г/л IgG; 1,252,5 г/л IgA.