Принцип нитросинего тетразолиевого теста заключается в поглощении из среды фагоцитирующими клетками бесцветного нитросинего тетразолия (НСТ) и восстановлении его в темно-синий диформазан. Активность восстановления НСТ отражает состояние бактерицидных пероксидазных систем клетки и коррелирует с образованием супероксидных радикалов.
Материалы и оборудование
1. 0,2 % раствор нитросинего тетразолия.
2. 2 % водный раствор метилового зеленого.
3. Водяная баня.
4. Метанол.
5. Предметные стекла.
6. Силиконированные пробирки.
Описание метода
Для постановки НСТ-теста к 0,1 мл лейковзвеси добавляют 0,1 мл 0,2 % нит-росинего тетразолия. Смесь инкубируют в водяной бане при температуре 37°С в течение 25 мин и при комнатной температуре в течение 15 мин. Далее клетки трижды отмывают средой 199 и готовят препараты. Высушенные препараты фиксируют метанолом и окрашивают 2 % водным раствором метилового зеленого от 30 с до 5 мин.
Учет реакции
Учет реакции включает в себя подсчет относительного и абсолютного количества диформазан-положительных лейкоцитов (возможно для специальных исследований расчет производить отдельно для нейтрофилов и моноцитов), вычисление среднего цитохимического коэффициента реакции (СЦК). Для определения СЦК при учете реакции отмечают диформазан-отрицательные клетки (0 степень активности), клетки с единичными гранулами диформазана или с площадью, окрашенной диформазаном, до 25-30 % (1 степень активности); клетки, цитоплазма которых на 30-70 % занята глыбками диформазана (2 степень активности) и клетки, у которых более 70 % цитоплазмы содержит гранулы ди-формазана (3 степень активности). В каждом препарате подсчитывают 300 лейкоцитов. Средний цитохимический коэффициент рассчитывают по формуле:
(0xa) + (1хб) + (2хв) + (3хг)
Ц= ___________________________ 100 ,
где 0, 1, 2, 3 - степень активности восстановления диформазана;
а, б, в, г - количество клеток каждой степени активности соответственно.
Похожие статьи
Добавь в закладки
| 
