Медицинский портал. студентам, врачам, медицинские книги

скачать медицинские учебники, лекции

Главная » Файлы » Иммунология

ПОСТАНОВКА НИТРОСИНЕГО ТЕТРАЗОЛИЕВОГО ТЕСТА
27.04.2010, 11:11


Принцип нитросинего тетразолиевого теста заключается в поглощении из среды фагоцитирующими клетками бесцветного нитросинего тетразолия (НСТ) и восстановлении его в темно-синий диформазан. Активность восстановления НСТ отражает состояние бактерицидных пероксидазных систем клетки и коррелирует с образованием супероксидных радикалов.

Материалы и оборудование

1. 0,2 % раствор нитросинего тетразолия.
2. 2 % водный раствор метилового зеленого.
3. Водяная баня.
4. Метанол.
5. Предметные стекла.
6. Силиконированные пробирки.

Описание метода

Для постановки НСТ-теста к 0,1 мл лейковзвеси добавляют 0,1 мл 0,2 % нит-росинего тетразолия. Смесь инкубируют в водяной бане при температуре 37°С в течение 25 мин и при комнатной температуре в течение 15 мин. Далее клетки трижды отмывают средой 199 и готовят препараты. Высушенные препараты фиксируют метанолом и окрашивают 2 % водным раствором метилового зеленого от 30 с до 5 мин.

Учет реакции

Учет реакции включает в себя подсчет относительного и абсолютного количества диформазан-положительных лейкоцитов (возможно для специальных исследований расчет производить отдельно для нейтрофилов и моноцитов), вычисление среднего цитохимического коэффициента реакции (СЦК). Для определения СЦК при учете реакции отмечают диформазан-отрицательные клетки (0 степень активности), клетки с единичными гранулами диформазана или с площадью, окрашенной диформазаном, до 25-30 % (1 степень активности); клетки, цитоплазма которых на 30-70 % занята глыбками диформазана (2 степень активности) и клетки, у которых более 70 % цитоплазмы содержит гранулы ди-формазана (3 степень активности). В каждом препарате подсчитывают 300 лейкоцитов. Средний цитохимический коэффициент рассчитывают по формуле:
    (0xa) + (1хб) + (2хв) + (3хг)
Ц=   ___________________________
    100 ,
где 0, 1, 2, 3 - степень активности восстановления диформазана;
а, б, в, г - количество клеток каждой степени активности соответственно.



Похожие статьи Добавь в закладки

Категория: Иммунология | Добавил: MedVUZ | Теги: иммунология, лабораторная диагностика
Просмотров: 5963 | Загрузок: 0 | Рейтинг: 0.0/0
Всего комментариев: 0
Добавлять комментарии могут только зарегистрированные пользователи.
[ Регистрация | Вход ]

РязГМУ поступить контакты сайт история медицинская академия информация скачать акушерство ОЗЗ Доктор Хаус Scrubs сериалы хирургия телефон лекции стоматология офтальмология Хью Лори клиника экзамен Теория Лжи юмор интерны актёры Доктор Тырса терапия PDF практические навыки фармакология учебник диагностика классификация лечение ЕГЭ травматология