Реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) в присутствии митогена - конканавалина А (Кон А) является одним из методов определения функционального состояния Т-системы иммунитета. Реакция основана на способности Т-лимфоцитов в присутствии митогена выделять биологически активные вещества - лимфокины, в том числе факторы, ингибирующие миграцию лейкоцитов.
Материалы и реактивы
1. Гепаринизированная исследуемая кровь.
2. Конканавалин А.
3. Изотонический раствор хлорида натрия.
4. Воск или пластилин.
5. Капилляры из набора для определения С-реактивного белка.
6. Центрифужные пробирки.
7. Микроскоп с окуляр-микрометром.
Описание метода
 Перед работой необходимо подготовить капилляры. С этой целью отбирают капилляры с одинаковым внутренним диаметром. На капилляры наносят метку на расстоянии 1/3 длины от любого края. На два часовых стекла или в две лунки планшета для иммунологических исследований наливают по 0.2 мл исследуемой крови. В первую порцию вносят 0.05 мл раствора Кон А в концентрации 10 мкг/мл (препарат растворяют в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия. Полученными смесями заполняют капилляры на 2 /3 длины (до метки). На каждую пробу берут не менее 6 капилляров (3 опытных и 3 контрольных). Заполненные капилляры запаивают воском или пластилином и помещают в маркированные центрифужные пробирки (контрольные и опытные капилляры помещают в разные пробирки). Капилляры в пробирке необходимо зафиксировать комочком ваты или пластилином в строго вертикальном положении. После этого капилляры центрифугируют в течение 5 мин при 800 об/мин, а затем помещают в термостат в вертикальном положении и инкубируют при температуре 37°С в течение 24 часов.
Учет результатов
После инкубации производят учет результатов. С этой целью под микроскопом с помощью окуляр-микрометра определяют величину миграции основной массы лейкоцитов от границы эритроцитарного осадка в контроле и опыте. Результаты выражают в виде процента миграции в опыте относительно контроля.
В норме процент миграции составляет 40-70%; повышение до 90 % или снижение до 30% является умеренным; выше 90% и ниже 30% - значительным. Увеличение показателя миграции свидетельствует о снижении функциональной активности лимфоцитов: их способности продуцировать лимфокины, в частности, фактора, угнетающего миграцию лейкоцитов (ФУМ). При радиационном иммунодефиците наиболее ранним и типичным признаком является увеличение показателя миграции до 90% и выше.
Похожие статьи
Добавь в закладки
| 
